УДК 577.126

n-3 ПОЛИНЕНАСЫЩЕННЫЕ ЖИРНЫЕ КИСЛОТЫ РЕГУЛИРУЮТ УРОВЕНЬ СТАБИЛЬНЫХ МЕТАБОЛИТОВ ОКСИДА АЗОТА У ВЫСОКОВАЛИФИЦИРОВАННЫХ СПОРТСМЕНОВ

Людинина А.Ю.^1,2, Паршукова О.И.^1,2, Бойко Е.Р.^1,2,

1-ИФ ФИЦ Коми НЦ УрО РАН, г. Сыктывкар
2-ФГБУ ВО СГУ им. П.Сорокина, г. Сыктывкар

salu_06@inbox.ru

Аннотация: Целью данного исследования было изучение взаимосвязи между уровнями n-3 незаменимых полиненасыщенных жирных кислот (n-3 ПНЖК) и стабильных метаболитов оксида азота (NO) в плазме спортсменов. Были обследованы высококвалифицированные лыжники-гонщики (мужчины, n=39). Профиль жирных кислот общих липидов плазмы определялся с помощью газовой хроматографии. Уровень NO в плазме изучался колориметрическим методом с помощью реакции с реагентом Грисса. Был продемонстрирован широко распространенный дефицит незаменимых n-3 ПНЖК в плазме спортсменов (более 80% испытуемых) в связи с дисбалансом уровней нитратов (NO3) и нитритов (NO2). Более низкое значение n-3 линоленовой кислоты в плазме было связано с уровнем NO3 ниже нормы. Более высокие уровни n-3 эйкозапентаеновой кислоты были связаны с уровнем NO2 выше нормы. Впервые продемонстрировано участие незаменимых n-3 ПНЖК в нитрит-нитратном пути синтеза NO у высококвалифицированных лыжников.

Ключевые слова: эссенциальные жирные кислоты, линоленовая кислота, эйкозапентаеновая кислота, оксид азота, нитрат, нитрит, лыжники-гонщики.

n-3 ПОЛИКАНЫКПАГАН МАЙ КИСЛОТАЛАРЫ ЖОГОРКУ КВАЛИФИКАЦИЯЛУУ СПОРТЧУЛАРДА ТУРУКТУУ АЗОТ КЫЧКЫЛЫНЫН МЕТАБОЛИТТЕРИНИН ДЕҢГЭЭЛИН ЖӨНГӨ САЛУУ

Людинина А.Ю.^1,2, Паршукова О.И.^1,2, Бойко Е.Р.^1,2,

¹- Россия Илимдер академиясынын Урал бөлүмүнүн Коми илимий центринин федералдык изилдөө борборунун Физиология институту, Сыктывкар ш.

²- П. Сорокин атындагы Сыктывкар мамлекеттик университети "жогорку билим берүү федералдык мамлекеттик бюджеттик билим берүү мекемеси, Сыктывкар ш.

salu_06@inbox.ru

Аннотация: Бул изилдөөнүн максаты, спортсмендердин плазмасындагы n-3 алмаштырылгыс поли каныкпаган май кислоталарынын (n-3 ПКМК) жана азот кычкылынын (NO) туруктуу метаболиттеринин ортосундагы өз ара байланышты изилдөө болгон. Жогорку квалификациялуу жарыш лыжачылары текшерилди (эркек, n =39). Жалпы плазма липиддеринин май кислотасынын профили газ хроматографиясынын жардамы менен аныкталды. Плазмадагы деңгээл грисс реагенти менен реакция аркылуу колориметриялык ыкма менен изилденген. Нитраттардын (NO3) жана нитриттердин (NO2) деңгээлинин дисбалансына байланыштуу спортчулардын плазмасында алмаштырылгыс n-3 ПКМКнын кеңири жетишсиздиги (сыналуучулардын 80% дан ашыгы) көрсөтүлдү. Плазмадагы n-3 линолен кислотасынын төмөнкү мааниси нормадан төмөн болгону NO3 менен байланыштуу. n-3 эйкозапентаен кислотасынын жогорку деңгээли нормадан жогору NO2 менен байланышкан. Биринчи жолу жогорку квалификациялуу лыжачыларда нитрит-нитрат синтез жолуна алмаштырылгыс n-3 ПКМКнын катышуусу көрсөтүлдү.

Негизги сөздөр: маанилүү май кислоталары, линолен кислотасы, эйкозапентаено кислотасы, азот кычкылы, нитрат, нитрит, жарыш лыжачылары.

n-3 Polyunsaturated Fatty Acids Are Associated with Stable Nitric Oxide Metabolites in Highly Trained Athletes

Lyudinina A.YU.^1,2, Parshukova O.I.^1,2, Boyko E.R.^1,2

¹IF Federal Research Center Komi Scientific Center Ural Branch RAS, Syktyvkar

²FGBU HE SSU named after. P. Sorokina, Syktyvkar

salu_06@inbox.ru

Abstract: Background: The aim of this study was to investigate the relationships between levels of n-3 essential polyunsaturated fatty acids (n-3 PUFAs) and stable nitric oxide (NO) metabolites in the plasma of athletes. Methods: Highly trained cross-country skiers (males, n = 39) were examined. The fatty acid profile of the total plasma lipids was determined by gas chromatography. The plasma NO level was studied by a colorimetric method via reaction with Griess reagent. Results: A widespread deficiency of essential n-3 PUFAs in the plasma of athletes (more than 80% of the subjects) was demonstrated in association with an imbalance in the levels of nitrates (NO3 ) and nitrites (NO2 ). A lower value of n-3 linolenic acid in the plasma was associated with a NO3 level below the normal range. Higher levels of n-3 eicosapentaenoic acid were associated with a concentration of NO2 above the normal value. Conclusion: For the first time, the participation of essential n-3 PUFAs in the nitrite–nitrate pathway of NO synthesis in highly trained skiers was demonstrated.

Keywords: n-3 polyunsaturated fatty acids; nitric oxide; nitrate; nitrite; cross-country skiers.

Введение

Показана связь эндотелиальной функции с метаболизмом жирных кислот [16]. Особая роль в этом принадлежит незаменимым n-3 полиненасыщенным жирным кислотам (n-3 ПНЖК). Доказано их положительное влияние на функциональное состояние сосудов здоровых людей [1] и оптимизацию физической работоспособности [20]. Известно, что n-3 ПНЖК улучшают функцию сосудистого эндотелия за счет повышения образования и биодоступности эндотелиально зависимого фактора релаксации - оксида азота (NO) через активацию эндотелиальной NO-синтазы [3]. Обсуждаются несколько возможных вариантов влияния n-3 ПНЖК на синтез NO, но все же точные механизмы действия жирных кислот не описаны. Так, предполагается, что n-3 ПНЖК содействуют увеличению доступности NO [1, 20]. Другой путь синтеза NO связывают с повышением синтеза эндотелиального NOx и даже увеличением активности эндотелиальной NO-синтазы [2]. В целом, такие положительные эффекты n-3 ПНЖК на уровень NO могут содействовать снижению системного сосудистого сопротивления и артериального давления [12]. В связи с этим, целью данного исследования было изучение взаимосвязи между уровнями n-3 ПНЖК и стабильных метаболитов NO в плазме спортсменов.

Материалы и методы. В общеподготовительный период тренировочного макроцикла обследованы высококвалифицированные лыжники-гонщики (юноши, n=39). Антропофизиометрические характеристики обследуемых представлены в таблице 1.

Таблица 1

Фоновые антропофизиометрические характеристики обследуемых лыжников-гонщиков

Показатель	Спортсмены
Возраст, лет	21,7±3,9
Рост, м	1,7±4,8
Масса тела, кг	72,8±4,1
ИМТ, кг/м2	22,8±1,1
Доля жира, %	9,6±2,7
МПК, л/мин	4,1±0,6

Все спортсмены являлись на момент обследования действующими членами сборной команды Республики Коми по лыжным гонкам, часть из которых входит в сборную России. Спортивная квалификация спортсменов – мастера спорта международного класса (МСМК, 8%), мастера спорта (МС, 15%), кандидаты в мастера спорта (КМС, 31%) и спортсмены первого взрослого разряда (46%) в соответствии с принятой в РФ классификации уровня мастерства.

Все процедуры проведены в соответствии с этическими стандартами Хельсинкской декларации. Исследование проведено на базе отдела экологической и медицинской физиологии ИФ ФИЦ Коми НЦ УрО РАН и одобрено локальным комитетом по биоэтике (от 1 ноября 2013 года и от 28 декабря 2022 год), все обследуемые дали информированное согласие на участие.

Критериями допуска к исследованию являлись возраст (от 18 до 25 лет) и отсутствие вредных привычек, острых и хронических заболеваний, признаков ОРВИ. Все лыжники находились под руководством тренера и следовали спортивным режимам тренировок, характерным для их соответствующего вида спорта.

У спортсменов измеряли массу и рост на медицинском весоростомере (Россия), процент массы жира организма при помощи жироанализатора Omron BF 302 (Япония), рассчитывали индекс массы тела (ИМТ) по формуле Кетле.

Анализ профиля жирных кислот в крови. Взятие венозной крови осуществляли натощак в покое. Уровень общего пула жирных кислот (ЖК) в общих липидах (фракция включает неэтерифицированные ЖК, фосфолипиды, триглицериды и эстерифицированный холестерин) плазмы крови определяли методом газовой хроматографии («Кристалл 2000М», ПИД, колонка «SupelcoWAX») с предварительным экстрагированием липидов по методу Фольча и получением метиловых эфиров ЖК. Профиль эссенциальных жирных кислот (n-3 ПНЖК) (α-линоленовой - ЛНК, эйкозапентаеновой - ЭПК и докозагексаеновой - ДГК) представлено в % от общего пула ЖК. В качестве нормы взяты референтные значения [7].

Определение уровня оксида азота в крови. Биохимический анализ уровня оксида азота включал в себя определение в плазме крови его стабильных метаболитов – нитритов (NO₂^-) и нитратов (NO₃^-) колориметрическим методом в реакции с реактивом Грисса, а также их суммы – показателя NO_x. В литературе установлена высокая корреляция между эндогенной продукцией NO в организме и расчетным показателем NO_x в плазме крови [6]. В связи с этим удобно оперировать именно показателем NO_x ввиду его достаточно простого аналитического определения.

Для изучения связи уровня эссенциальных ПНЖК с показателем NOx в крови мы разделили спортсменов относительно нормативного уровня стабильных метаболитов оксида азота [6] на следующие группы: I группа – спортсмены, у которых уровень нитритов (NO₂^-) в крови был в пределах нормы (n=16); II группа – спортсмены, у которых уровень нитритов в крови превышал норматив (0-5) (n=23); III группа – спортсмены, у которых уровень нитратов (NO₃^-) в крови был в пределах нормы (n=19); IV группа - спортсмены, у которых уровень нитратов в крови был ниже нормы (12-25) (n=20).

Оценку физической работоспособности проводили с помощью эргоспирометрической системы «Oxyсon-Pro» (Jaeger, Германия) в режиме «Breath by Breath». Все обследуемые проходили велоэргометрический нагрузочный тест со ступенчато увеличивающейся нагрузкой «до отказа» на велоэргометре. Определяли показатели максимального потребления кислорода (МПК), порог анаэробного обмена (ПАНО), потребление кислорода на ПАНО (ПК ПАНО), ватт-пульс ПАНО, ДК (дыхательный коэффициент) и частота сердечных сокращений (ЧСС), как было описано ранее.

Статистическую обработку результатов осуществляли при помощи программы «Statistica» (версия 8.0, StatSoft, Inc. 2007). Учитывая немногочисленность исследуемых выборок и существенные индивидуальные различия в значениях определяемых показателей, проводили проверку данных на нормальность распределения с применением критерия Шапиро–Уилка. Поскольку полученные данные не подчинялись нормальному закону распределения, использовали непараметрические методы сравнения - U критерий Манна-Уитни и Фридмана. Результаты представлены в виде M±SD. Коэффициенты корреляции между двумя переменными были определены с помощью рангового анализа Спирмена. Критическим уровнем значимости статистических гипотез принимали р<0,05.

Результаты исследования и их обсуждение

В общеподготовительный период профиль ЖК плазмы крови спортсменов характеризовался дефицитом n-3 α-ЛНК (С18:3), ЭПК (С20:5) и ДГК (С22:6) по сравнению с рекомендуемыми нормами. Доля эссенциальной α-ЛНК в плазме крови у лыжников-гонщиков составила в среднем 0,3%, а среднее значение уровня ЭПК и ДГК в крови спортсменов составило – 0,7% и 1,4% соответственно, что было ниже нормы почти в два раза. Низкая доля α-ЛНК отмечена практически у всех лыжников, ЭПК – у 80% спортсменов, а ДГК – у 94% обследуемых, что вероятно связано не только с недостаточным потреблением в питании эссенциальных кислот, но и с особенностями метаболизма этих ЖК при интенсивных физических нагрузках (табл. 2).

Таблица 2

Уровень исследуемых метаболитов в плазме крови лыжников-гонщиков относительно рекомендуемых норм (n=39)

Показатели	M ± SD	норматив
α-Линоленовая кислота C18:3 n-3, %	0,3±0,2	>0,6
Эйкозапентаеновая кислота C20:5 n-3, %	0,7±0,4	>1,4
Докозагексаеновая кислота C22:6 n-3, %	1,4±0,7	>2,4
NOx, мкмоль/л	22,0±5,6	17-35
NO2-, мкмоль/л	10,2±5,2	0-5
NO3-, мкмоль/л	11,8±6,3	12-25

Примечание: Нормативные значения для эссенциальных жирных кислот в крови взяты из источника [Hodson., 2008]; Нормативные значения для показателей стабильных метаболитов оксида азота [Granger et al., 1996]

Уровень показателя NOx в крови обследованных спортсменов в общеподготовительный период соответствовал нормативным значениям [Granger et al., 1996] (табл. 2). При этом, уровень стабильных метаболитов NO – NO₂^- и NO₃^- не входили в референсные значения. Так, у 64% спортсменов выявлен повышенный уровень NO₂^- относительно нормы, которой в среднем составлял 10,2 мкмоль/л. Уровень NO₃^-, наоборот, у половины обследованных лыжников-гонщиков был ниже нормы (разброс показателя 1,9 - 30,8 мкмоль/л).

Корреляционные взаимодействия между метаболитами в плазме крови лыжников-гонщиков представлены в табл.3

Таблица 3

Корреляционная связь между n-3 ПНЖК и стабильными метаболитами NOx в плазме крови лыжников-гонщиков

Показатели	Значение корреляции Спирмена, Rs	Уровень P
C18:3 n3 & NOx	0,255	0,115
C18:3 n3 & NO2^-	-0,304	0,059
C18:3 n3 & NO3^-	0,461	0,003
C20:5 & NOx	0,116	0,481
C20:5 & NO2^-	0,449	0,004
C20:5 & NO3^-	-0,315	0,050
С22:6 & NOx	0,025	0,877
С22:6 & NO2^-	-0,192	0,239
С22:6 & NO3^-	0,195	0,233

Показано, что более низкое значение ЛНК (0,21 моль/%) было сопряжено с более низким уровнем NO₃^-. Коэффициент корреляции между n-3 C18:3&NO₃^- составил 0,461 (p=0,003) (табл.3). Более высокое значение ЭПК (0,8 моль/%) было сопряжено с более высоким уровнем NO₂^-. Коэффициент корреляции между n-3 C20:5& NO₂^- составил 0,449 (p=0,004). Также показана обратная корреляция между n-3 C20:5&NO₃^- -0,315 (p=0,050).

Корреляционный анализ показателей ФР выявил наличие ассоциации между ЖК и показателями физической работоспособности - C18:3 n3 & МПК/кг (Rs = 0,486; p=0.016), С22:6 & МПК (Rs = 0,406; p=0.048) и С22:6 & ЧСС фон (Rs = 0,413; p=0.045). Выявлена отрицательная корреляция между уровнем NO₂^-&ЧСС фон (Rs = -0,445; p=0.048). 

Результаты исследования связи уровня эссенциальных ПНЖК с показателем NOx представлены в таблице 4.

Таблица 4

Уровень эссенциальных n-3 ПНЖК в сопоставлении со стабильными метаболитами NOx в плазме крови лыжников-гонщиков

	α-Линоленовая кислота C18:3 n-3, %	Эйкозапентаеновая кислота C20:5 n-3, %	Докозагексаеновая кислота C22:6 n-3, %
нитриты
I группа	0,37±0,39	0,56±0,37	1,47±0,89
II группа	0,24±0,09	0,79±0,38	1,38±0,60
уровень p	0.242	0.0178	0.819
нитраты
III группа	0,4±0,35	0,83±0,53	1,51±0,82
VI группа	0,21±0,06	0,77±0,25	0,91±0,25
уровень p	0.0169	0.168	0.354

Среднее значение ЛНК около 0,4 моль/% соответствовало общепринятому уровню NO₃^- в крови спортсменов. В тоже время выявлено, что при выраженном дефиците ЛНК наблюдались значимо низкие значения NO₃^- (p=0,016) в крови лыжников (рис. 1).

Рисунок 1. Распределение α-линоленовой кислоты в плазме крови спортсменов в зависимости от уровня NO₃.  Примечание: данные представлены в виде M ± SD. С18:3 – линоленовая кислота.

Среднее значение ЭПК около 0,6 моль/% соответствовало нормальному уровню NO₂^- в крови. Более высокие значения ЭПК наблюдались при больших уровнях NO₂^- (p=0,017) в крови лыжников (рис. 2).

Рисунок 2. Распределение эйкозапентаеновой кислоты в плазме крови спортсменов в зависимости от уровня NO₂^-.  Примечание: данные представлены в виде M ± SD. С20:5 – эйкозапентаеновая кислота.

Последние данные in vitro позволяют предположить, что трансформации в структуре мембраны изменяют функции белков-резидентов и, следовательно, клеточные ответы [9]. На поверхности зрелых клеток эндотелия обнаружены плазмалемные бокаловидные углубления - кавеолы, которые играют важную роль в компартментализации, модуляции и интеграции клеточной сигнализации. В области кавеол сосредоточена эндотелиальная NO-синтаза, находясь в неактивном состоянии в связи с кавеолином -1 и кальмодулином [9]. Кавеолы, помимо ПНЖК, содержат большое количество рецепторов белков, ацетилхолина, брадикинина, эстрогенов, эндотелиального фактора роста сосудов и играют определяющую роль в регуляции эндотелиального везикулярного транспорта [19]. Например, эндотелий-независимая вазодилатация плечевой артерии ассоциирована с содержанием ПНЖК эритроцитов мембран у пациентов с артериальной гипертензией [5]. Пищевые п-3 ПНЖК могут участвовать в модуляции липидного состава верхушки липидных рафтов/кавеол микродоменов, влияя тем самым на клеточную сигнализацию, транспорт белков и клеточную цитокинетику [4] и, соответственно, на функциональный ответ клетки. Есть данные о дифференцированной связи ЭПК и ДГК с небольшой частью кавеол / рафтов ассоциативно связанных с белком - Annexin A2 из семейства цитозольных Са2+ -связывающих белков, который играет ключевую роль в сосудистой функции [13].

Исследование спортсменов, тренирующих выносливость, выявило повышение уровня NO в сыворотке крови и в целом оптимизацию физической работоспособности после 3-недельного приема n-3 ПНЖК [20]. По другим данным, ежедневный прием добавок n-3 ПНЖК (0,87 г/день) в течение 3-х недель уменьшает воспаление дыхательных путей у спортсменов. Потребление n-3 ПНЖК приводит к увеличению NO, уменьшает сосудосуживающий ответ на норадреналин и ангиотензин 2, усиливает сосудорасширяющие ответы [12].

В ходе настоящего исследования нами было показано, что показатель NOx в крови обследованных спортсменов в общеподготовительный период соответствовал литературным данным и референтным значениям [6]. Как нами было отмечено ранее [14] у высокотренированных лыжников-гонщиков в соревновательный период, по сравнению с подготовительным периодом тренировок, наблюдалось снижение уровня NO, главным образом, за счет NO₃^-, что прослеживается и в данной работе. Более низкий уровень NO сопровождается ухудшением адаптивных возможностей организма спортсменов, за счет снижения ферментативного синтеза NO, что может приводить к снижению физической работоспособности в целом. В общеподготовительный период тренировок, согласно нашим результатам, показатель NOx плазмы крови спортсменов соответствовал общепринятым нормативам (22,0±5,6 мкмоль/л). Однако, значения NO_2- были выше нормы, а уровень NO₃- на нижней границе нормы. Учитывая найденную прямую корреляционную связь между n-3 C18:3&NO₃^- (Rs=0,461; p=0,003) можем предположить об опосредованном участии n-3 ЛНК в поддержании уровня NO₃^- в крови в пределах нормы. Об этом также свидетельствует более низкий уровень NO₃^- (p=0,016) в крови лыжников при более выраженном дефиците ЛНК относительно нормы. Ранее нами было показана значимая корреляционная связь у спортсменов высшей квалификации между МПК и NOх при нагрузке максимальной мощности [15].

Ранее нами показано, что в целом при достаточном потреблении с пищей n-3 ПНЖК обнаружен фоновый дефицит n-3 ПНЖК в плазме крови у большинства лыжников-гонщиков [10]. Так, доля эссенциальной α-ЛНК в плазме крови у лыжников-гонщиков ниже нормы в 2,2 раза при адекватном потреблении ее с пищей. Как известно, ЛНК является важной эссенциальной ЖК, основным источником которой, кроме масла периллы (58%), является льняное масло (57%), а также соевое и рапсовое масла (около 10 %). Между тем, существенная роль α-ЛНК в реализации целого спектра различных функций, например, активном ее участии в энергообеспечении аэробной мощности организма, в регуляции ритма сердца [10] обуславливает необходимость компенсации дефицита ее содержания в организме. Также показано активное участие α-ЛНК в метаболизме эссенциальных ЖК путем повышения активности десатураз ЖК в микросомах печени, что, в свою очередь, ведет к конверсии α-ЛНК в ЭПК – одного из основных биорегуляторов организма [7].

Описан механизм, раскрывающий влияние ЭПК на увеличение биодоступности NO, в том числе на синтез NO и эндотелиальную функцию через активацию АМФ-активируемой протеинкиназы в ответ на истощение внутриклеточного АТФ [18]. Среднее значение ЭПК (около 0,6 моль/%) было ниже рекомендуемой нормы (1,0-2,2 моль/%), при этом соответствуя нормальному уровню NO₂^-в крови, а при более высоком значении ЭПК показано большее значение уровня NO₂^- (p=0,017) в крови лыжников. Коэффициент корреляции Спирмена между n-3 C20:5&NO₂^-составил 0,449 (p=0,004). Дефицит ЭПК в крови у обследуемых (0,6±0,5 mol%) может свидетельствовать об активном окислительном стрессе в организме, поскольку известно, что ЭПК ингибирует процессы перекисного окисления липидов в мембранных везикулах, а также ЭПК улучшает баланс между NO и пероксинитритом и действует синергетически со статинами [11]. Кроме того, ЭПК ослабляет, индуцированное пальмитиновой кислотой, образование АФК, экспрессию молекул адгезии и цитокинов, активацию связанных с апоптозом белков [8]. Механизм влияния ЭПК на развитие атеросклероза заключается в воздействии на эндотелиальную дисфункцию и окислительный стресс, а также в усилении синтеза эйкозаноидов (которые расширяют сосуды и уменьшают тромбообразование и воспаление), снижении риска атерогенной дислипопротеинемии [17]. Кроме того, эссенциальные n-3 ПНЖК не только усиливают образование NO, но также реагируют с ним с образованием соответствующих производных нитроалкенов, которые обеспечивают сосудистую дилатацию, ингибируют дегрануляцию нейтрофилов и образование супероксидов, ингибируют активацию тромбоцитов и повышают активность PPAR и высвобождение NO, тем самым предотвращая агрегацию тромбоцитов, образование тромбов, атеросклероз и сердечно-сосудистые заболевания. Все это может быть предметом будущих дискуссий о преимуществах n-3 ПНЖК-обогащенных диет в регуляции сосудистого тонуса и повышении физической работоспособности и выносливости в целом.

Заключение:

Впервые нами продемонстрирована связь незаменимых n-3 ПНЖК с плазменным уровнем NO и возможное участие n-3 ПНЖК в нитрит-нитратном пути синтеза оксида азота у высокотренированных лыжников. Установлено, что более высокое значение незаменимой эйкозапентаеновой кислоты способствует накоплению нитритов (NO2) в крови спортсменов, тем самым создавая условия для выработки/депонирования оксида азота. Более высокие уровни незаменимых α-LNA в плазме способствуют повышению уровня нитратов (NO3), а также регулируют запасы оксида азота (NO), которые необходимы для поддержания сосудистого тонуса и в целом нормального функционирования сердечно-сосудистой системы у высокотренированных спортсменов.

Литература:

1. Anderson, J.S.; Nettleton, J.A.; Herrington, D.M.; Johnson, W.C.; Tsai, M.Y.; Siscovick, D. Relation of omega-3 fatty acid and dietary fish intake with brachial artery flow-mediated vasodilatation in the multi-ethnic study of atherosclerosis. Am. J. Clin. Nutr. 2010, 92, 1204–1213.

2. Bailey, S.J.; Vanhatalo, A.; Winyard, P.G.; Jones, A.M. The nitrate-nitrite-nitric oxide pathway: Its role in human exercise physiology. Eur. J. Sport Sci. 2012, 12, 309–320.

3. Celec, P.; Yonemitsu, Y. Vascular endothelial growth factor–Basic science and its clinical implications. Pathophysiology 2004, 1, 69–75.

4. Chapkin, R.S.; McMurray, D.N.; Davidson, L.A.; Patil, B.S.; Fan, Y.; Lupton, J.R. Bioactive dietary long-chain fatty acids: Emerging mechanisms of action. Br. J. Nutr. 2008, 100, 1152–1157.

5. Colussi, G.; Catena, C.; Dialti, V.; Mos, L.; Sechi, L.A. The vascular response to vasodilators is related to the membrane content of polyunsaturated fatty acids in hypertensive patients. J. Hypertens. 2015, 33, 993–1000.

6. Granger, D.L.; Taintor, R.R.; Boockvar, K.S.; Hibbs, J.B.J. Measurement of nitrate and nitrite in biological samples using nitrate reductase and Griess reaction. Methods Enzymol. 1996, 268, 142–151.

7. Hodson, L.; Skeaff, C.M.; Fielding, B.A. Fatty acid composition of adipose tissue and blood in humans and its use as a biomarker of dietary intake. Progress. Lipid Res. 2008, 47, 348–380.

8. Ishida, T.; Naoe, S.; Nakakuki, M.; Kawano, H.; Imada, K. Eicosapentaenoic Acid Prevents Saturated Fatty Acid-Induced Vascular Endothelial Dysfunction: Involvement of Long-Chain Acyl-CoA Synthetase. J. Atheroscler. Thromb. 2015, 22, 1172–1185.

9. Li, Q.R.; Zhang, Q.; Wang, M.; Liu, F.Z.; Zhao, S.M.; Ma, J.; Luo, N.; Li, N.; Li, Y.S.; Xu, G.W. Docosahexaenoic acid affects endothelial nitric oxide synthase in caveolae. Arch. Biochem. Biophys. 2007, 466, 250–259.

10. Lyudinina, A.Y.; Markov, A.L.; Bojko, E.R. Essential Fatty Acid Associated with Heart Rate Variability in Highly Trained Male Cross-Country Skiers: A Pilot Study. Physiologia 2024, 4, 54–63.

11. Mason, R.P.; Jacob, R.F.; Corbalan, J.J.; Malinski, T. Combination Eicosapentaenoic Acid and Statin Treatment Reversed Endothelial Dysfunction in HUVECs Exposed to Oxidized LDL. J. Clin. Lipidol. 2014, 8, 342–343.

12. Mozaffarian, D.; Wu, J.H. Omega-3 fatty acids and cardiovascular disease: Effects on risk factors, molecular pathways, and clinical events. J. Am. Coll. Cardiol. 2011, 58, 2047–2067.

13. Park, J.; Yamaura, T.; Kawamoto, J.; Kurihara, T.; Sato, S.B. Reciprocal Modulation of Surface Expression of Annexin A2 in a Human Umbilical Vein Endothelial Cell-Derived Cell Line by Eicosapentaenoic Acid and Docosahexaenoic Acid. PLoS ONE 2014, 9, e85045.

14. Parshukova, O.I.; Nutrikhin, A.V.; Boyko, E.R. The significance of the determination of nitric oxide in highly trained cross-country skiers. Physiother. Sports Med. 2017, 6, 31–36. (In Russian)

15. Parshukova, O.I.; Varlamova, N.G.; Potolitsyna, N.N.; Lyudinina, A.Y.; Bojko, E.R. Features of metabolic support of physical performance in highly trained cross-country skiers of different qualifications during physical activity at maximum load. Cells 2022, 11, 39.

16. Philip, N.; Yun, X.; Pi, H. Fatty acid metabolism promotes TRPV4 activity in lung microvascular endothelial cells in pulmonary arterial hypertension. Am. J. Physiol. Lung Cell Mol. Physiol. 2024, 326, 252–265.

17. Shramko, V.S.; Polonskaya, Y.V.; Kashtanova, E.V.; Stakhneva, E.M.; Ragino, Y.I. The Short Overview on the Relevance of Fatty Acids for Human Cardiovascular Disorders. Biomolecules 2020, 10, 1127.

18. Wu, Y.; Zhang, C.; Dong, Y.; Wang, S.; Song, P.; Viollet, B.; Zou, M.H. Activation of the AMP-activated protein kinase by eicosapentaenoic acid (EPA, 20:5 n-3) improves endothelial function in vivo. PLoS ONE 2012, 7, e35508.

19. Xu, Y.; Buikema, H.; Gilst, W.H.; Henning, R.H. Caveolae and endothelial dysfunction: Filling the caves in cardiovascular disease. Eur. J. Pharmacol. 2008, 585, 256–260.

20. Zebrowska, A.; Mizia-Stec, K.; Mizia, M.; G ˛asior, Z.; Poprz˛ecki, S. Omega-3 fatty acids supplementation improves endothelial function and maximal oxygen uptake in endurance-trained athletes. Eur. J. Sport. Sci. 2015, 15, 305–314.