I. ЗДОРОВЬЕ ЧЕЛОВЕКА В НЕБЛАГОПРИЯТНЫХ УСЛОВИЯХ СРЕДЫ

УДК 612.1/8.155.2

РАСПРОСТРАНЕННОСТЬ ПОЛИМОРФИЗМОВ ГЕНОВ ITGA2 И ITGB3 И ХАРАКТЕРИСТИКА НЕКОТОРЫХ ПАРАМЕТРОВ ТРОМБОЦИТАРНОГО ЗВЕНА ГЕМОСТАЗА У СТУДЕНТОК

Кононец И.Е., Алымова А.Б.

КГМА им И.К. Ахунбаева, Бишкек

ikononecz@mail.ru,  alymova91781a@gmail.com

Аннотация: Сохранение и укрепление репродуктивного здоровья студенток, которые в будущем станут потенциалом страны, становится одной из основных задач современного общества.  Одним из показателей, влияющих на репродуктивное здоровье женщин, является гемостаз, который активно реагирует на различные экзогенные и эндогенные воздействия, может иметь врожденные и приобретенные функциональные нарушения. К настоящему времени выявлено несколько десятков генетических вариантов, носительство которых ассоциировано с развитием протромботических сдвигов в системе гемостаза.  Доказана роль полиморфизмов генов тромбоцитарных рецепторов: ITGA2 и ITGB3С в развитии патологических изменений адгезивно-агрегационной активности тромбоцитов, что может привести к репродуктивным потерям. В связи с чем нами изучена распространенность полиморфизмов генов ITGA2 и ITGB3 и связь между выявленными генотипами и некоторыми параметрами тромбоцитарного звена гемостаза у студенток г. Бишкек. Выявлено, что у обследованных преобладал гетерозиготный вариант наследования полиморфизма изучаемых генов системы гемостаза. Чаще встречались мутации в гене ITGA2 в гетерозиготном состоянии и гетерозиготный вариант наследования мутаций по гену ITGB3. Анализ отдельных параметров первичного гемостаза у студенток разных групп, разделенных в зависимости от варианта наследования мутаций по генам ITGA2 и ITGB3, показал, что у студенток с отсутствием генетических полиморфизмов, ассоциированных с риском развития тромбозов, в 1,3 раза больше количество тромбоцитов и тромбокрит, чем у студенток с гетерозиготным вариантом наследования полиморфизма гена ITGB3, между остальными показателями статистически значимой разницы в группах не обнаружено.

Ключевые слова: репродуктивное здоровье, гемостаз, генетические полиморфизмы, ген, генотип, тромбоциты, тромбоцитарные индексы.

СТУДЕНТТЕРДИН ITGA2 ЖАНА ITGB3 ГЕНДЕРИНИН ПОЛИМОРФИЗМДЕРИНИН ТАРАЛЫШЫ ЖАНА ГЕМОСТАЗДЫН ТРОМБОЦИТТИК ШИЛТЕМЕНИН КӨРСӨТКҮЧТӨРҮНҮН МҮНӨЗДӨМӨСҮ

Кононец И.Е., Алымова А.Б.

И.К. Ахунбаев атындагы Кыргыз мамлекеттик медициналык академиясы, Бишкек

ikononecz@mail.ru,  alymova91781a@gmail.com

Аннотация: Келечекте өлкөнүн потенциалы боло турган студент кыздардын репродуктивдик ден соолугун сактоо жана чыңдоо азыркы коомдун негизги милдеттеринин бири болуп калууда.  Аялдардын репродуктивдик ден соолугуна таасир этүүчү көрсөткүчтөрдүн бири-гемостаз, ал ар кандай экзогендик жана эндогендик таасирлерге активдүү жооп берет, тубаса жана пайда болгон функционалдык бузулууларга ээ болушу мүмкүн. Азыркы убакта бир нече тубаса генетикалык варианттарды алып жүргөндөрдү аныктоо   гемостаз системасындагы протромботикалык жылыштардын өнүгүшү менен байланыштырсак болот. Тромбоцит рецепторлорунун гендеринин полиморфизмдеринин ролу далилденген: Патологиялык өзгөрүүлөр ITGA2 жана ITGB3С тромбоциттердин адгезия-агрегация активдүүлүгү репродуктивдик жоготууларга алып келиши мүмкүн. Ушуга байланыштуу биз ITGA2 жана ITGB3 гендеринин полиморфизмдеринин таралышын жана табылган генотиптер менен гемостаздын тромбоциттик шилтеменин айрым параметрлеринин ортосундагы байланышты изилдедик. Изилдөөдө гемостаз системасынын гендеринин полиморфизминин гетерозиготалык тукум куучулук варианты басымдуулук кылгандыгы аныкталды. Көбүнчө гетерозиготалык абалда ITGA2 гениндеги мутациялар жана ITGB3 гениндеги мутациялардын гетерозиготалуу варианты кездешти.  ITGA2 жана ITGB3 гендери боюнча мутациялардын тукум куучулук вариантына жараша бөлүнгөн ар кандай топтогу студент кыздардын баштапкы гемостаздын айрым параметрлерин талдоо, тромбоздун өнүгүү коркунучу менен байланышкан генетикалык полиморфизмдери жок студент кыздарда тромбоциттердин саны 1,3 эсе көп экенин көрсөттү.

Негизги сөздөр: репродуктивдүү ден соолук, гемостаз, генетикалык полиморфизмдер, ген, генотип, тромбоциттер, тромбоцит индекстери.

THE PREVALENCE OF POLYMORPHISMS OF THE ITGA2 AND ITGB3 GENES AND THE CHARACTERISTICS OF SOME PARAMETERS OF THE PLATELET LINK OF HEMOSTASIS IN FEMALE STUDENTS.

Kononets I.E., Alymova A.B.

KSMA named after I.K. Akhunbaeva, Bishkek

ikononecz@mail.ru,  alymova91781a@gmail.com

Annotation: Preserving and strengthening the reproductive health of female students—who will play a crucial role as the future potential of the country—has emerged as one of the primary goals of modern society. One indicator influencing women's reproductive health is hemostasis, which reacts significantly to various exogenous and endogenous factors and may present congenital or acquired functional disorders. To date, several dozen genetic variants associated with prothrombotic shifts in the hemostasis system have been identified. The role of polymorphisms in the platelet receptor genes ITGA2 and ITGB3 has been shown to contribute to pathological changes in the adhesive-aggregation activity of platelets, potentially leading to reproductive losses [7].  In this context, we studied the prevalence of polymorphisms in the ITGA2 and ITGB3 genes and examined the relationship between identified genotypes and certain parameters of platelet hemostasis in students from Bishkek. Our findings revealed that the heterozygous variant of inheritance for the polymorphisms in the hemostasis system genes prevailed among the examined participants. Specifically, mutations in the GATA2 gene in a heterozygous state and a heterozygous variant of inheritance for the ITGB3 gene were more common. Analysis of individual parameters of primary hemostasis among female students, categorized based on the inheritance variant of mutations in the ITGA2 and ITGB3 genes, demonstrated that those without genetic polymorphisms associated with thrombosis exhibited a platelet count and thrombocrit that were 1.3 times higher than their counterparts with a heterozygous variant for the ITGB3 polymorphism. However, no statistically significant differences were found in other indicators among the groups.

Keywords: reproductive health, hemostasis, genetic polymorphisms, genes, genotypes, platelets, platelet indices.

Введение

Репродуктивное здоровье является важнейшей частью популяционного здоровья и качественной характеристикой воспроизводства населения. В настоящее время все сильнее осознается, что значение здоровья самой женщины, ее адаптационные и иммунно-защитные возможности становятся самым слабым звеном, которое может способствовать снижению репродуктивных возможностей и уровня здоровья [2]. Студентки – будущие матери, репродуктивный резерв нашего общества, от здоровья которых зависит будущее нашей республики.

Одним из показателей, влияющих на репродуктивное здоровье, является гемостаз. Физиологически нормальное состояние системы гемостаза необходимо для зачатия и вынашивания беременности, какие-либо отклонения могут привести к женскому бесплодию, к замершей беременности, выкидышу, осложнениям беременности и родов [4].

Гемостаз активно реагирует на различные экзогенные и эндогенные воздействия, может иметь врожденные и приобретенные функциональные нарушения [6]. В последние годы, в связи с развитием молекулярной генетики, появилась возможность диагностики генетических полиморфизмов, ассоциированных с риском развития тромбозов, что позволило объяснить ранее необъяснимые случаи формирования тяжелых осложнений гестации [1]. 

Тромбоцитарный гемостаз включает в себя процесс агрегации тромбоцитов и формирование тромба [3]. С точки зрения вклада генетически обусловленных факторов риска развития атеротромбоза особое внимание направлено на тромбоцитарное звено гемостаза (в ракурсе патологических изменений адгезивно-агрегационной активности тромбоцитов) и доказана роль полиморфизмов генов тромбоцитарных рецепторов: ITGA2 и ITGB3[5,7].

Ген ITGA2 кодирует белок интегрин альфа-2 – мембранный гликопротеин, экспрессирующийся на мембранах различных клеток, включая мегакариоциты, фибробласты и тромбоциты. На мембране тромбоцитов GPIa образует комплекс с GPIIa, представляющий собой один из рецепторов коллагена [9].

Ген ITGB3 кодирует белок интегрин бета-3 (ITGB3) – мембранный гликопротеин, известный как тромбоцитарный гликопротеин IIIа. На мембране тромбоцитов GPIIIa образует комплекс с GPIIb (альфа-субъединица, кодирующаяся геном ITGA2B), представляющий собой тромбоцитарный рецептор фибриногена [10].

Учитывая вышесказанное, представляется актуальным изучение генетических полиморфизмов, ассоциированных с риском развития тромбофилии у студенток, что позволит использовать эти данные медицинскими работниками для прогнозирования возможных осложнений во время беременности и родов, а также и принятия превентивных мер.

Цель исследования: оценка распространенности полиморфизмов генов ITGA2 и ITGB3 и связи между выявленными полиморфизмами генов и некоторыми параметрами тромбоцитарного звена гемостаза у студенток.

Материалыы и методы исследования

Объектом обследования стали 107 условно здоровых студенток в возрасте 18-23 лет, проживающих в городе Бишкек. В качестве биологического Материалыа для исследования была использована венозная кровь. Проводили оценку первичного гемостаза путем подсчета количества тромбоцитов и тромбоцитарных индексов на гематологическом анализаторе Mindray BC-6800, КНР. Для идентификации аллелей полиморфизма генов ITGA2 и ITGB3 использовался метод полимеразной цепной реакции с детекцией результатов в режиме реального времени (наборы реактивов компании «ДНК Технология, Россия). Материалыом для исследования явилась геномная ДНК человека, выделенная из лейкоцитов периферической крови.

Полиморфизм для ITGA2-α2 оценивался по следующим критериям:

С/С — полиморфизм не обнаружен; С/Т — полиморфный вариант гена в гетерозиготном состоянии; ТТ — гомозиготный вариант полиморфного гена.

Для фактора ITGB-3β оценка генотипа по маркеру проводилась в соответствии со следующими параметрами: Т/Т — полиморфизм не обнаружен; Т/С — полиморфный вариант гена в гетерозиготном состоянии; С/С — гомозиготный вариант полиморфного гена.

Для анализа данных использовано приложение Microsoft Excel и пакет статистического анализа данных StatPlus версии 8.0. 

Результаты исследования и их обсуждение

Первым этапом исследования нами проведен анализ частоты встречаемости генотипов и полиморфных аллелей генов ITGA2 и ITGB3 у студенток г. Бишкек, а также определены варианты наследования, которые представлены в таблице 1.

Таблица 1

Распространенность гетерозиготных и гомозиготных полиморфных аллелей генов ITGA2 и ITGB3 у студенток

Параметр	Число обследованных, n=107		Степень достоверности
	абсолютное число	Р±m, %	p	t
α2-Интегрин (ITGA2, тромбоцитарный рецептор коллагена)
Вариант нормы: генотип (С/С)	53	49,5±1,9
Мутации в гетерозиготном состоянии (С/Т)	46	42,9±1,9	*<0,001	*2,41
Мутации в гомозиготном состоянии (Т/Т)	8	7,5±2,2	*<0,001	*13,4
3β-Интегрин (ITGB, тромбоцитарный рецептор фибриногена)
Вариант нормы: генотип (Т/Т)	94	87,9±4,5
Мутации в гетерозиготном состоянии (Т/С)	13	12,2±3,9	*<0,001	*68,50
Мутации в гомозиготном состоянии (С/С)	0	0

Примечание: * (р, t) - степень статистической значимости определялась относительно варианта нормы.

Исследование показало, что у обследованных студенток преобладал гетерозиготный вариант (С/Т и Т/Т) наследования полиморфизма генов ITGA2 и ITGB3. С высокой степенью статистической значимости (p<0,001) у 42,9%±1,9 обследованных девушек были выявлены мутации в гене ITGA2 в гетерозиготном состоянии, а у 7,5%±2,2 - в гомозиготном состоянии.

Только гетерозиготный вариант наследования мутаций по гену ITGB3 встречался у обследованных студенток в 12,2%±3,9 случаев. У трех студенток, из когорты с полиморфизмами (n=67), обнаружено сочетание 2-х гетерозиготных мутаций по генам ITGA2(С/Т) и ITGB3(Т/С), что соответствует 4,6% ±1,5 случаев.

Вторым этапом исследования проведен анализ некоторых параметров тромбоцитарного гемостаза у студенток. Для полноценной оценки всех девушек разделили по группам в зависимости от наличия полиморфизма и варианта наследования мутаций в генах ITGA2 и ITGB3: I группа - студентки, у которых не обнаружено полиморфизмов по генам ITGA2 и ITGB3; II группа - студентки, с мутациями в гене ITGA2 в гетерозиготном состоянии (С/Т); III группа – студентки с мутациями  гомозиготном состоянии (Т/Т) входили в третью группу; студентки с гетерозиготным вариантом (Т/С) наследования мутаций по гену ITGB3 вошли в IV группу. Характеристика параметров первичного гемостаза – количество тромбоцитов (PLT), тромбокрит (PCT), средний объем тромбоцитов (MPV), ширина распределения тромбоцитов (PDW) и коэффициент крупных тромбоцитов (P-LCR) у студенток обследованных групп представлена в таблице 2.

Анализ полученных данных показал, что несмотря на то, что определяемые показатели во всех группах исследования были в пределах референсных значений, у студенток I группы PLT и PCT в 1,3 раза больше, чем у студенток IV группы. Статистически значимой разницы между остальными показателями в группах не обнаружено.

Таблица 2

Характеристика отдельных параметров тромбоцитарного гемостаза у студенток обследованных групп

Параметр (референсные значения)	I группа М±m	II группа М±m	III группа М±m	IV группа М±m
Количество тромбоцитов, PLT (150-400·10^9/л)	297,94±10,99*	286,60± 9,54	264,25±29,80	237±13,00
Средний объем тромбоцитов, MPV (9,40-12,40 фл)	9,21±0,14	9,06±0,15	9,45±0,38	9,66±0,24
Ширина распределения тромбоцитов, PDW (10,00-20,00 фл)	15,78±0,04	15,68±0,05	15,85±0,13	15,82±0,05
Тромбокрит, PCT (0,10-0,40 %)	0,27±0,01*	0,26±0,01	0,24±0,02	0,20±0,01
Коэффициент крупных тромбоцитов, P-LCR (13,00-43,00 %)	20,96±0,95	19,74±0,99	21,48±2,45	20,98±1,17

Примечание: * - p<0,01 при сравнении между группами 1 и 4

Из литературных источников известно, что особенностью полиморфных вариантов данных генов является то, что они могут долгое время никак себя не проявлять. Патологические симптомы обычно возникают при дополнительных условиях (особенности питания, беременность, прием лекарств, образ жизни и т. д.) [8]. Дальнейшее исследование будет направлено на выявление известных генетических полиморфизмов, ассоциированных с риском развития тромбозов, изучение сочетания нескольких мутаций и изменений в показателях гемостаза у студенток с таким носительством.

Выводы:

1. В результате исследования нами выявлено, что у студенток г. Бишкек при изучении генов ITGA2 и ITGB3 у 50 девушек на 100 обследуемых встречаются мутации гена ITGA2, при этом преобладает гетерозиготный вариант наследования полиморфизма гена ITGA2. Гетерозиготный вариант наследования полиморфизма гена ITGB3 встречается у 12 студенток г. Бишкек на 100 обследованных.

2. Анализ отдельных параметров первичного гемостаза у студенток разных групп, разделенных в зависимости от варианта наследования мутаций по генам ITGA2 и ITGB3, показал, что статистически значимой разницы между показателями в группах не было, кроме того, что у студенток с отсутствием генетических полиморфизмов, ассоциированных с риском развития тромбозов в 1,3 раза больше количество тромбоцитов и тромбокрит, чем у студенток с гетерозиготным вариантом наследования полиморфизма гена ITGB3.

Литература:

1. Алымова, А.Б., Цопова И.А., Кононец, И.Е., Кибец Е.А., Джайлобаева Э.А. Современные представления о гемостазе, нарушениях системы гемостаза и их диагностике. // Журнал «Вестник КРСУ. – 2024. –Т.24– №1.– С.123-129.

2. Григорьев Ю.А., Соболева С.В. Репродуктивное здоровье как качественная характеристика популяции // Acta Biomedica Scientifica. –2013. –№3. –С.157-167.

3. Момот А.П. Проблема тромбофилии в клинической практике // Российский журнал детской гематологии и онкологии (РЖДГиО).  – 2015; – Т.2–№1 –С.36-48.

4. Момот А.П., Тараненко И.А., Цывкина Л.П. Эволюция представлений о тромбофилии и ее роли в проблемах репродукции человека // Акушерство и гинекология. – 2013. –№ 2. – С.4-9.

5. Мяндина Г. И. Полиморфизмы генов ITGB3 и протромбина среди пациентов с дислипидемиями, страдающих гипертонической болезнью и ишемической болезнью сердца // Здоровье и образование в XXI веке.– 2014. – Т.16.– № 4. – С.56-59.

6. Путилова Н.В., Башмакова Н.В. Перинатальные аспекты антифосфолипидного синдрома. // Акушерство и гинекология. –2007.– №3. – С.61-65.

7. Шумилов Д.С. Полиморфизмы генов интегринов ITGA2 и ITGB3, ассоциированных с риском развития коронарного атеросклероза у жителей Республики Адыгея // Вестник Адыгейского государственного университета. Серия 4: Естественно-математические и технические науки. – 2015.– № 3. – С.82-86.

8. Gramellini D., Piantelli G., Verrotti C. et al. Doppler velocimetry and nostress test in severe fetal growth restriction // Clin. Exp. Obstet. Gynecol. – 2001.– Vol.23. – P.33-39.

9. Leone A. M, De Stefano V. et al. Scientific letters. Glycoprotein Ia C807T gene polymorphism and increased risk of recurrent acute coronary syndromes: a five year follow up // Heart. – 2004. –V.90. –P.567-569.

10. Tofteng C. L., Bojesen P., Tybjaerg-Hansen S. E., et al. Integrin beta-3 leu33-to-pro polymorphism and risk of hip fracture: 25 years follow-up of 9233 adults from the general population // Pharmacogenet. Genomics. – 2007. –V.17:8.– Р.85-91.